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제 1세부에서는 염증관련 다양한 질환에 관련된 단백질 또는 펩타이드를 확보하여 세포침투성 vector (HIV-1 Tat, PEP-1 등)에 융합시켜 세포침투성 융합단백질을 발현, 정제하여 세포 및 조직내에서의 침투효율과 생리활성을 분석한다. 세포침투성 융합단백질의 세포 및 조직내로의 침투조건의 최적화를 확립하여 단백질 치료제재로의 가능성을 확인한다. 또한 발굴된 단백질의 단항체를 생산하고 단항체의 특성을 규명함으로써 생산된 단항체는 단백질과 관련된 질병의 진단키트 개발 및 조직면역염색 등 다양하게 사용할 수 있다.

단계/연차 연구내용 연구방법
1단계 1 차년
염증질환 관련 신소재 단백질 발굴
세포침투성 vector와 융합
세포침투성 융합단백질 발현, 정제 및 생산
Proteomic 분석 및 자료수집을 통한 염증관련 단백질을 확보한다.
세포침투 vector인 HIV-1 Tat 또는 PEP-1 vector와 융합하여 세포침투성 발현벡터를 제조한다. 제조된 발현벡터를 대장균에서 과대발현시켜 affinity column work을 통하여 정제한다.
2 차년
신소재 단백질의 세포내 침투분석
세포내 침투 후 활성도 분석
신소재 단백질의 기능 분석
형광염색, 조직염색, Western blotting으로 융합단백질의 세포 및 조직내로의 침투효율을 분석한다. 또한 활성도 분석을 통하여 세포내 침투 후 융합단백질의 활성을 분석한다.
Western blotting, MTT assay로 융합단백질의 세포보호 기능을 분석한다.
3 차년
신소재 단백질의 세포 내 특성 및 세포에 미치는 영향 분석
침투효율의 최적화 조건 확립
신소재 단백질의 단항체 생산
Western blotting, MTT assay, RT-PCR를 이용하여 세포에 미치는 영향을 분석한다.
융합단백질을 마우스에 주사하여 단항체를 생산한다.

 

 

단계/연차 연구내용 연구방법
2단계 1 차년

신소재 융합단백질의

    염증억제 효능 평가

침투효율 증진법 개발

신소재 융합단백질의 항염증 효과를 분석한다.

염증질환 관련 신소재 단백질을 발굴한다.

융합단백질의 침투효율을 높이는 나노 에멀전        

     및  천연소재를 개발한다.

2 차년

ㆍ신소재 융합단백질의

    염증억제 작용기전 규명

전사인자에 미치는 효능을 분석한다.

활성산소에 미치는 영향을 분석한다.

천연소재의 작용 기전을 분석한다.

3 차년 신소재 융합단백질의

   약리활성 규명

항염증 효과 신호전달 기전을 분석한다.

천연소재의 신호전달 기전을 분석한다.